Qu’est-ce que PCR?


PCR: Comment nous copions l’ADN

La réaction de la chaîne de la polymérase (PCR) est un moyen efficace et efficient de copier ou « amplifier » de petits segments d’ADN ou d’ARN

Utilisation de la PCR, des millions de copies d’une section ADN sont effectuées en quelques heures seulement, obtenant suffisamment d’ADN nécessaires à l’analyse. Cette méthode innovante mais simple permet aux cliniciens de diagnostiquer et de superviser les maladies en utilisant un minimum quantité d’échantillon, telle que le sang ou le tissu.

Qu’est-ce que PCR?

La préparation de l’échantillon au moyen de PCR est in vitro, ou à l’extérieur du corps dans un laboratoire et est Sur la base du processus naturel de la réplication de l’ADN. Dans sa forme la plus simple, la réaction se produit lorsqu’un échantillon d’ADN et de l’ADN-polymérase, des nucléotides, des amorces et des autres réactifs (produits synthétiques composés) à un tube d’échantillon. Les réactifs facilitent la réaction nécessaire pour copier le code ADN.

en plus de détecter AR des maladies dans un échantillon, la PCR permet de surveiller la quantité de virus présente ou de la charge virale, dans l’organisme d’une personne. Dans des maladies telles que l’hépatite C ou les infections par le virus de l’immunodéficience humaine (VIH), la charge virale est une bonne indication de la façon dont une personne peut être malade ou dans quelle mesure le médicament ou le traitement d’une personne est. Compter sur ces informations, les médecins peuvent déterminer quand commencer le traitement et la réponse de la personne au traitement, créant un traitement personnalisé pour chaque personne.

Il existe trois étapes claires dans chaque cycle de PCR et chaque cycle en double environ la quantité d’ADN Diana. C’est une réaction exponentielle, de sorte que plus d’un milliard de copies d’ADN d’origine ou « cible » sont générés en 30 à 40 cycles PCR.

Préparation de l’échantillon

Avant de démarrer PCR, l’ADN d’un échantillon doit être isolé. L’élimination de l’ADN est un processus en plusieurs étapes pouvant être effectué manuellement ou avec un instrument en tant qu’instrument COBAS® amplipprep, le premier instrument pour préparer des échantillons automatiquement, sans intervention humaine. Après la préparation de l’échantillon, le processus de PCR en trois étapes commence.

1. Séparation de l’ADN Diana: Denaturation

Au cours de la première étape de la PCR, appelée dénaturation, le tube contenant L’échantillon d’ADN est chauffé à plus de 90 degrés Celsius (194 degrés Fahrenheit), qui sépare l’ADN à double brin en deux chaînes distinctes. La température élevée brise les articulations relativement faibles entre les nucléotides qui constituent le code ADN.

2. Fixation des amorces à la séquence d’ADN: hybridation

La PCR ne copie pas tous les ADN de l’échantillon. Copier uniquement une séquence très spécifique de code génétique, à laquelle les amorces PCR sont dirigées. Par exemple, la chlamydia a un schéma singulier de nucléotides spécifiques des bactéries. La PCR ne copiera que les séquences d’ADN spécifiques présentes à Chlamydia et absentes dans les autres espèces de bactéries. Pour ce faire, PCR utilise des amorces, des oligonucléotides synthétiques (morceaux d’ADN synthétiques courts) qui sont unis ou hybridan, uniquement à des séquences de part et d’autre de la région d’ADN Diana. Deux amorces sont utilisées à l’étape deux: une pour chaque chaîne d’ADN individuelle nouvellement séparée. Les amorces sont jointes au début de la séquence qu’ils copieront, délimitant la séquence pour la troisième étape. Au cours de l’étape deux, le tube est refroidi et la fixation de l’amorce se produit entre 40 et 60 degrés Celsius (104 et 140 degrés Fahrenheit). La deuxième étape génère deux chaînes d’ADN distinctes, avec des séquences délimitées par les amorces. Les deux chaînes sont prêtes à être copiées.

3. Effectuer une copie: extension

dans la troisième phase de la réaction, appelée extension, la température est augmentée à environ 72 degrés Celsius (161,5 degrés Fahrenheit). À partir des régions marquées par des amorces, des nucléotides dans la solution sont ajoutés aux amorces hybridées par l’ADN-polymérase afin de créer une nouvelle chaîne d’ADN complémentaire de chacune des chaînes de modèle individuelles. Après avoir terminé l’extension, deux copies identiques de l’ADN d’origine ont été créées.

Après avoir effectué deux copies de l’ADN par le biais de la PCR, le cycle commence à nouveau, cette fois en utilisant le nouvel ADN en double. Chaque duplicata crée deux nouvelles copies et après environ 30 ou 40 cycles PCR, plus d’un milliard de copies du segment d’ADN d’origine ont été créées. Étant donné que le processus de la PCR est automatique, il peut être complété en quelques heures seulement.Dans un environnement de santé, la PCR élabore suffisamment de copies d’ADN cible de l’échantillon clinique pour permettre une analyse; Les résultats de ces tests de diagnostic et de contrôle fournissent des cliniciens et d’autres informations sur les fournisseurs de soins de santé pour guider le traitement.

Leave a Comment

Votre adresse e-mail ne sera pas publiée. Les champs obligatoires sont indiqués avec *