O que é PCR?


PCR: Como copiamos o DNA

A reação da cadeia de polimerase (PCR) é uma maneira eficaz e eficiente de copiar ou “amplificar” os pequenos segmentos de DNA ou de RNA

Usando o PCR, milhões de cópias de uma seção de DNA são feitas em apenas algumas horas, obtendo o DNA suficiente necessário para análise. Este método inovador, mas simples permite que os médicos diagnostiquem e supervisionem as doenças Montante da amostra, como sangue ou tecido.

O que é PCR?

A preparação da amostra por meio de PCR é in vitro, ou fora do corpo em um laboratório, e é Com base no processo natural da replicação de DNA. Na sua forma mais simples, a reação ocorre quando uma amostra de DNA e DNA-polimerase, nucleotídeos, primers e outros reagentes (compostos produtos químicos sintéticos) para um tubo de amostra. Reagentes facilitam a reação necessária para copiar o código de DNA.

Além de detectar AR doenças em uma amostra, a PCR permite monitorar a quantidade de vírus presente ou carga viral, no organismo de uma pessoa. Em doenças como hepatite C ou infecções pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV), a carga viral é uma boa indicação de quão doente uma pessoa pode ser ou quão bem a medicação ou tratamento de uma pessoa é. Contando com esta informação, os médicos podem determinar quando iniciar o tratamento e a resposta da pessoa ao tratamento, criando um tratamento personalizado para cada pessoa.

Existem três etapas claras em cada ciclo de PCR e cada ciclo duplicado aproximadamente a quantidade de DNA Diana. É uma reação exponencial, de modo que mais de um bilhão de cópias de DNA original ou “alvo” são gerados em 30 a 40 ciclos de PCR.

Preparação da amostra

Antes de começar a PCR, o DNA de uma amostra deve ser isolado. A remoção de DNA é um processo de várias etapas que pode ser feito manualmente ou com um instrumento como o instrumento COBAS® AmpliPREP, o primeiro instrumento para preparar amostras automaticamente, sem intervenção humana. Depois de A preparação da amostra, começa o processo de PCR de três etapas.

1. Separação do DNA Diana: Desnaturação

Durante o primeiro passo do PCR, chamado de desnaturação, o tubo contendo A amostra de DNA é aquecida a mais de 90 graus Celsius (194 graus Fahrenheit), que separa o DNA de cadeia dupla em duas cadeias separadas. A temperatura elevada quebra as articulações relativamente fracas entre os nucleotídeos que compõem o código de DNA.

2. fixação de primers para a sequência de DNA: hibridização

O PCR não copia todo o DNA na amostra. Copie apenas uma sequência muito específica de código genético, para as quais os primers de PCR são direcionados. Por exemplo, a clamídia tem um padrão singular de nucleótidos específicos das bactérias. A PCR copiará apenas as seqüências de DNA específicas que estão presentes na clamídia e ausentes nas outras espécies de bactérias. Para fazer isso, a PCR usa primers, oligonucleótidos sintéticos (peças curtas de DNA sintético) que são unidas, ou híbridã, apenas para sequências em ambos os lados da região de Dna Diana. Dois primers são usados no passo dois: um para cada cadeia de DNA individual recém-separada. Os primers são unidos no início da sequência eles copiarão, delimitando a sequência para o passo três. Durante o passo dois, o tubo é resfriado e a fixação do primer ocorre entre 40 e 60 graus Celsius (104 e 140 graus Fahrenheit). O passo dois gera duas cadeias de DNA separadas, com sequências delimitadas por primers. As duas cadeias estão prontas para serem copiadas.

3. Realizando uma cópia: Extensão

Na terceira fase da reação, chamada extensão, a temperatura é aumentada para cerca de 72 graus Celsius (161,5 graus Fahrenheit). Começando em regiões marcadas por iniciadores, os nucleotídeos na solução são adicionados aos primers hibridados pela DNA-polimerase para criar uma nova cadeia de DNA complementar de cada uma das cadeias de modelos individuais. Depois de concluir a extensão, duas cópias idênticas do DNA original foram criadas.

Depois de fazer duas cópias do DNA por meio do PCR, o ciclo começa novamente, desta vez usando o novo DNA duplicado. Cada duplicado cria duas novas cópias e após aproximadamente 30 ou 40 ciclos de PCR, mais de um bilhão de cópias do segmento de DNA original foram criados. Como o processo do PCR é automático, ele pode ser concluído em apenas algumas horas.Em um ambiente de saúde, a PCR elabora cópias suficientes do DNA alvo da amostra clínica para permitir a análise; Os resultados desses testes de diagnóstico e controle fornecem aos clínicos e outras informações de profissionais de saúde para orientar o tratamento.

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