Cos’è PCR?


PCR: come copiano il DNA

La reazione a catena della polimerasi (PCR) è un modo efficace ed efficiente per copiare o “amplificare” piccoli segmenti di DNA o di RNA

Utilizzando la PCR, milioni di copie di una sezione DNA sono realizzate in poche ore, ottenendo il DNA sufficiente per l’analisi. Questo metodo innovativo ma semplice consente ai medici di diagnosticare e supervisionare le malattie usando un minimo importo del campione, come sangue o tessuto.

Cos’è PCR?

La preparazione del campione tramite PCR è in vitro o fuori dal corpo in un laboratorio ed è in base al processo naturale della replica del DNA. Nella sua forma più semplice, la reazione si verifica quando un campione di DNA e DNA-polimerasi, nucleotidi, primer e altri reagenti (composti sostanze chimiche sintetiche) a un tubo di campionamento. I reagenti facilitano la reazione necessaria per copiare il codice del DNA.

Oltre a rilevare AR Malattie in un campione, la PCR consente di monitorare la quantità di virus presente o il carico virale, nell’organismo di una persona. In malattie come l’epatite C o le infezioni del virus dell’immunodeficienza umana (HIV), il carico virale è una buona indicazione di quanto sia malata una persona o quanto sia il farmaco o il trattamento di una persona. Contando su queste informazioni, i medici possono determinare quando avviare il trattamento e la risposta della persona al trattamento, creando un trattamento personalizzato per ogni persona.

Esistono tre passaggi chiari in ciascun ciclo PCR e ciascun ciclo duplicato la quantità di DNA Diana. È una reazione esponenziale, in modo che più di un miliardo di copie del DNA originale o “target” siano generate in cicli da 30 a 40 PCR.

Preparazione del campione

Prima di iniziare la PCR, il DNA di un campione deve essere isolato. La rimozione del DNA è un processo a più passaggi che può essere eseguito manualmente o con uno strumento come strumento Ampliprep Cobas®, il primo strumento per preparare automaticamente i campioni, senza intervento umano. Dopo La preparazione del campione, inizia il processo PCR in tre fasi.

1. Separazione del DNA Diana: Denaturazione

Durante il primo passo della PCR, chiamata denaturazione, il tubo contenente Il campione di DNA viene riscaldato a più di 90 gradi Celsius (194 gradi Fahrenheit), che separa il DNA a doppio filamento in due catene separate. La temperatura elevata rompe le articolazioni relativamente deboli tra i nucleotidi che costituiscono il codice del DNA.

2. Fissaggio Di Primer alla sequenza del DNA: ibridazione

La PCR non copia tutto il DNA nel campione. Copia solo una sequenza molto specifica di codice genetico, a cui sono diretti i primer PCR. Ad esempio, la clamidia ha un modello singolare di nucleotidi specifici dei batteri. La PCR copierà solo le sequenze specifiche del DNA presente in Chlamydia e assente nelle altre specie di batteri. Per fare ciò, PCR utilizza primer, oligonucleotidi sintetici (brevi pezzi del DNA sintetico) che sono uniti o ibridan, solo per sequenze su entrambi i lati della regione del DNA Diana. Due primer vengono utilizzati al punto due: uno per ogni stringa DNA individuale appena separata. I primer sono uniti all’inizio della sequenza, copieranno, delimitando la sequenza per il passaggio tre. Durante il passaggio due, il tubo viene raffreddato e il fissaggio del primer avviene tra 40 e 60 gradi Celsius (104 e 140 gradi Fahrenheit). Step Due genera due catene DNA separate, con sequenze delimitate dai primer. Le due catene sono pronte per essere copiate.

3. Esecuzione di una copia: estensione

Nella terza fase della reazione, chiamata estensione, la temperatura è aumentata a circa 72 gradi Celsius (161,5 gradi Fahrenheit). A partire dalle regioni contrassegnate dai primer, i nucleotidi nella soluzione vengono aggiunti ai primer ibridati da DNA-polimerasi per creare una nuova catena di DNA complementare da ciascuna delle singole catene modello. Dopo aver completato l’estensione, sono state create due copie identiche del DNA originale.

Dopo aver effettuato due copie del DNA tramite il PCR, il ciclo inizia di nuovo, questa volta utilizzando il nuovo DNA duplicato. Ogni duplicato crea due nuove copie e dopo circa 30 o 40 cicli PCR, sono state create più di una miliardo di copie del segmento del DNA originale. Poiché il processo della PCR è automatico, può essere completato in poche ore.In un ambiente sanitario, PCR elabora sufficienti copie di DNA target dal campione clinico per consentire l’analisi; I risultati di questi test diagnostici e di controllo forniscono clinici e altre informazioni sui fornitori di assistenza sanitaria per guidare il trattamento.

Leave a Comment

Il tuo indirizzo email non sarà pubblicato. I campi obbligatori sono contrassegnati *