Què és la PCR?


PCR: com copiem l’ADN

La reacció en cadena de la polimerasa (PCR) és una manera eficaç i eficient de copiar o “amplificar” petits segments d’ADN o d’ARN a

Utilitzant la PCR, es fan milions de còpies d’una secció d’ADN en tan sols unes hores, obtenint suficient ADN necessari per a anàlisi. Aquest mètode innovador però senzill permet als clínics diagnosticar i supervisar les malalties utilitzant una quantitat mínima de mostra, com sang o teixit.

Què és la PCR?

la preparació de la mostra per mitjà de la PCR es realitza in vitro, o fora de el cos en un laboratori, i es basa en el procés natural de replicació de l’ADN. en la seva forma més senzilla, la reacció es produeix quan s’afegeix una mostra d’ADN i ADN-polimerasa, nucleòtids, encebadors i altres reactius (compostos químics sintètics) a un tub de mostra. Els reactius faciliten la reacció necessària per copiar el codi de l’ADN.

a més de detectar ar les malalties en una mostra, la PCR permet supervisar la quantitat de virus present, o càrrega viral, en l’organisme d’una persona. En malalties com l’hepatitis C o les infeccions pel virus d’immunodeficiència humana (VIH), la càrrega viral és una bona indicació del que malalta que pot estar una persona o el bé que està funcionant el medicament o tractament d’una persona. Comptant amb aquesta informació, els metges poden determinar quan iniciar el tractament i la resposta de la persona a el tractament, creant un tractament personalitzat per a cada persona.

Hi ha tres passos clars en cada cicle de PCR i cada cicle duplica aproximadament la quantitat d’ADN diana. Es tracta d’una reacció exponencial, de manera que es generen més de mil milions de còpies de l’ADN original o “diana” en de 30 a 40 cicles de PCR.

Preparació de la mostra a

Abans d’iniciar la PCR, s’ha d’aïllar l’ADN d’una mostra. l’extracció d’ADN és un procés de múltiples passos que pot realitzar-se manualment o amb un instrument com l’instrument COBAS® AmpliPrep, el primer instrument a preparar mostres de forma automàtica, sense la intervenció humana. Després de la preparació de la mostra, s’inicia el procés de PCR de tres passos.

1. Separació de l’ADN diana: desnaturalització

durant el primer pas de la PCR, anomenat desnaturalització, el tub que conté la mostra d’ADN s’escalfa a més de 90 graus Celsius (194 graus Fahrenheit), el que separa l’ADN bicatenari en dues cadenes separades. la temperatura elevada trenca les unions relativament febles entre els nucleòtids que componen el codi de l’ADN.

2. Fixació d’encebadors a la seqüència d’ADN: hibridació

La PCR no copia tot l’ADN en la mostra. Còpia només una seqüència molt específica de codi genètic, a la qual es dirigeixen els encebadors de la PCR. Per exemple, la Chlamydia té un patró singular de nucleòtids específic del bacteri. La PCR copiarà només les seqüències d’ADN específiques que són presents a la Chlamydia i absents en les altres espècies de bacteris. Per fer això, la PCR utilitza encebadors, oligonucleòtids sintètics (trossos curts d’ADN sintètic) que s’uneixen, o hibriden, només a seqüències en qualsevol costat de la regió d’ADN diana. S’utilitzen dos encebadors en el pas dos: un per cada cadena d’ADN individual recentment separada. Els encebadors s’uneixen a l’inici de la seqüència que copiaran, delimitant la seqüència per al pas 3. Durant el pas dos, el tub es refreda i la fixació de l’encebador es produeix entre 40 i 60 graus Celsius (104 i 140 graus Fahrenheit). El pas 2 genera dues cadenes d’ADN separades, amb les seqüències delimitades pels encebadors. Les dues cadenes estan a punt per ser copiades.

3. Realització d’una còpia: extensió

A la tercera fase de la reacció, anomenada extensió, s’augmenta la temperatura a aproximadament 72 graus Celsius (161,5 graus Fahrenheit). Començant en les regions marcades pels encebadors, els nucleòtids en la solució s’afegeixen als encebadors hibridizados per la ADN-polimerasa per crear una cadena d’ADN complementari de cadascuna de les cadenes plantilla individuals. Després de completar l’extensió, s’han creat dues còpies idèntiques de l’ADN original.

Després de fer dues còpies de l’ADN per mitjà de la PCR, el cicle comença de nou, aquesta vegada utilitzant el nou ADN duplicat. Cada duplicat crea dues noves còpies i després d’aproximadament 30 o 40 cicles de PCR, s’han creat més de mil milions de còpies de l’segment d’ADN original. A causa de que el procés de la PCR és automàtic, pot completar en tan sols unes hores.En un entorn d’atenció sanitària , la PCR elabora suficients còpies de l’ADN diana a partir de la mostra clínica com per permetre l’anàlisi ; els resultats d’aquestes proves de diagnòstic i control proporcionen als clínics i altres proveïdors d’atenció sanitària informació per orientar el tractament.

Leave a Comment

L'adreça electrònica no es publicarà. Els camps necessaris estan marcats amb *